การตรวจวิเคราะห์จุลินทรีย์ในเนื้อไก่ และไข่

บทปฏิบัติการ

เรื่อง   การตรวจวิเคราะห์จุลินทรีย์ในเนื้อไก่ และไข่

วันที่ทำการทดลอง :  11 พฤศจิกายน 2558

ตัวอย่างอาหาร :  ไข่ไก่

เครื่องมือและวัสดุอุปกรณ์  :

     1.       ไข่ไก่ 1 ฟอง

     2.       9 ml. ของ 0.1% peptone

     3.       สำลีพันปลายไม้ที่ฆ่าเชื้อแล้ว 1 อัน

     4.       225 ml. ของ 0.85% NaCl + glass bead

     5.       9 ml. ของ 0.85% NaCl

     6.       หลอดทดลอง

     7.       ปิเปต

     8.       plate

     9.       Standard plate count agar ( PCA )

     10.   อาหารเลี้ยงเชื้อ PDA

     11.   แอลกอฮอล์

     12.   225 ml Lactose broth

     13.   อาหารเลี้ยงเชื้อ SC และ RV

วิธีการทดลอง

การวิเคราะห์จำนวนจุลินทรีย์ทั้งหมดที่เปลือกไข่ ( Swab technique )

      1.   ทำ swabping ที่ผิวของเปลือกไข่

     2.     นำสำลีพันปลายไม้ใส่ลงในหลอดทดลองที่มีสารละลาย 0.1% peptone เขย่าอย่างน้อย 25 ครั้ง

      3.   ทำ dilution ที่ระดับความเข้มข้น 10-3 , 10-4 และ 10-5

      4.    Pour plate ด้วย PCA

      5.      บ่มที่อุณหภูมิ 30-32 องศาเซลเซียส นาน 1-2 วัน

            การเตรียมตัวอย่างเนื้อไข่

     1.       ล้างไข่ด้วยสบู่ แช่ใน 70% alcohol นาน 20 นาที

     2.       ผ่านเปลวไฟ  เจาะเปลือกเป็นรู

     3.       เทเนื้อไข่ 25 g ลงใน flask ที่มี 225 ml. ของ 0.85% NaCl + glass bead

     4.     เขย่าให้เข้ากัน แล้วทำ dilution ที่ระดับความเข้มข้น 10-2 และ 10-3

      5.        นำตัวอย่างที่เจือจางไปหาจำนวนจุลินทรีย์ทั้งหมด ยีสต์รา และ salmonella

การตรวจจุลินทรีย์ทั้งหมดในเนื้อไข่

     1.        ดูดเนื้อไข่ดิบ 25 ml ใส่ลงใน flask ที่มี 225 ml. ของ 0.85% NaCl + glass bead

      2.        เขย่าให้เข้ากัน แล้วทำ dilution ที่ระดับความเข้มข้น 10-1 , 10-2 และ 10-3

     3.        Pour plate ด้วย PCA

    4.     บ่มที่อุณหภูมิ 30-32 องศาเซลเซียส นาน 1-2 วัน

การตรวจยีสต์และรา

      1.         ความเข้มข้น 10-1

     2.        Spread plate ด้วย PDA

    3.    บ่มที่อุณหภูมิ 20-25 องศาเซลเซียส นาน 1-2 วัน

     

ตารางบันทึกผลการทดลอง

	ผลการตรวจวิเคราะห์
จำนวนจุลินทรีย์ทั้งหมดที่เปลือกไข่ ( APC, SPC/ 1 egg )	0
จำนวนจุลินทรีย์ทั้งหมดในเนื้อไข่ ( APC, SPC/g )	0
Yeast , Mold	ไม่พบ
salmonella	ไม่พบ

สรุปผลการทดลอง

           ตามมาตรฐานของไข่ไก่กำหนดคุณลักษณะทางจุลชีววิทยาของไข่ไก่ไว้ดังนี้ คือ ต้องไม่พบเชื้อ  salmonella จากการทดลอง พบว่า ไม่พบจุลินทรีย์ที่เปลือกไข่และในเนื้อไข่ ไม่พบยีสต์รา และไม่พบ salmonella  แสดงว่า จำนวนจุลินทรีย์และ salmonella  อยู่ในเกณฑ์ที่มาตรฐานกำหนด 

การวิเคราะห์คุณภาพทางจุลินทรีย์ในน้ำนม

วัตถุประสงค์

     1.       เพื่อตรวจสอบคุณภาพของนมพาสเจอร์ไรซ์และนมสเตอริไลซ์ทางด้านจุลินทรีย์

     2.       เพื่อศึกษาการเสื่อมเสียของน้ำนม

   

อุปกรณ์และอาหารเลี้ยงเชื้อ

     1.       ตัวอย่างนมพาสเจอร์ไลซ์และนมสเตอริไลซ์อย่างละ 1 ตัวอย่าง

     2.       อาหารเลี้ยงเชื้อ ได้แก่

-          Potato Dextrose Agar (PDA) pH 3.5 ใช้หา Yeast and Moid

-          Plate Count Agar (PCA)

-          Violet Red Bile agar (VRB)

-          Levine’s eosin methylene blue agar (EMB)

-          หลอดอาหาร lauryl trptose broth (LST broth)

-          หลอดอาหาร brilliant green Lactose bile broth (BGLB broth)

-          หลอดอาหารอีซี

วิธีการทดลอง

การทดสอบโดยอ้อม

    

 1.       การทดสอบจุลินทรีย์ในน้ำนมด้วยวิธีเมทิลีนบลู รีดักชั่น หรือเอ็มบีอาร์เทสต์ (methylene blue reduction test ; MBR Test )

  Ø ปิเปตตัวอย่างนมซึ่งมีสามตัวอย่างลงในหลอดทดลองละ 10 mL ซึ่งตัวอย่างที่หนึ่งทำสองหลอด หลอดหนึ่งให้เป็นหลอด control

  Ø นำหลอด control ไปต้มเดือด 5 นาที

  Ø นำทั้งสี่หลอดไปเติม methylene blue หลอดละ 1 mL กลับหลอดให้ผสมกัน

  Ø นำไปตั้งใน water bath จับเวลา และดูการเปลี่ยนแปลงของสีทุกๆครึ่งชั่วโมง

   

  2.       รีซาซูรินเทสต์ 1 ชั่วโมง ( One hour Resazurin test )

  Ø ปิเปตตัวอย่างนมซึ่งมีสามตัวอย่างลงในหลอดทดลองละ 10 mL

  Ø เติม 1 mL รีซาซูริน กลับหลอดให้ผสมกัน

  Ø นำไปแช่ใน water bath 1ชั่วโมง

  Ø ดูการเปลี่ยนแปลงของสีแล้วบันทึกผล

การทดสอบโดยตรง

     

     1.       Yeast and Mold count

  Ø เตรียมอาหารสำหรับใช้ spred plate เพื่อหายีสต์และรา ( PDA)

  Ø ปิเปตตัวอย่างอาหารที่หนึ่งมา dilute ที่สามความเข้มข้น

  Ø ทำการ spred plate ที่ dilution 10° - 10-²

  Ø นำไปบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 วัน

  Ø ดูผลและนับจำนวนจุลินทรีย์

     2.       Thermoduric bacteria

  Ø เตรียมอาหาร PCA สำหรับใช้ pour plate

  Ø ทำการ pour plate ที่ dilution 10° - 10-² โดยใช้นมตัวอย่างที่ 1

  Ø นำไปบ่มที่อุณหภูมิ 32 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 3 วัน

  Ø ดูผลและนับจำนวนจุลินทรีย์

     3.       Phychrotrophic bacteria

  Ø เตรียมอาหาร PCA สำหรับใช้ pour plate

  Ø ทำการ pour plate ที่ dilution 10° - 10-² โดยใช้นมตัวอย่างที่ 1

  Ø นำไปบ่มที่อุณหภูมิ 7 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 5 วัน

  Ø ดูผลและนับจำนวนจุลินทรีย์

สรุปผลการทดลอง

     1.       การตรวจโดยวิธี MBR Test ตัวอย่างนมทั้งสามตัวอย่างไม่มีการเปลี่ยนแปลง แสดงว่าตัวอย่างนมมีคุณภาพดี มีจุลินทรีย์น้อย

     2.       การตรวจโดยวิธี One hour Resazurin test นมตัวอย่างที่หนึ่งเป็นสีน้ำเงินแสดงว่าตัวอย่างนมมีคุณภาพยอดเยี่ยม ตัวอย่างที่สองเป็นสีม่วงอ่อนแสดงว่ามีคุณภาพดี ตัวอย่างที่สามเป็นสีม่วงอมชมพู แสดงว่ามีคุณภาพพอใช้

     3.       การตรวจวิเคราะห์หาปริมาณยีสต์และรา ไม่สามารถนับได้เนื่องจากจำนวนโคโลนีที่ขึ้นไม่อยู่ในช่วงที่ใช้รายงานผลคือ 25 – 250 โคโลนี

     4.       การตรวจวิเคราะห์ thermoduric bacteria นับจำนวนได้ 2950 CFU/mL

     5.       การตรวจวิเคราะห์ Phychrotrophic bacteria ไม่พบเชื้อ

     6.       การตรวจวิเคราะห์โคลิฟอร์ม จำนวนหลอดที่เกิดแก๊ส  1  1  0

เปิดตารางได้ค่า MPN Index per 100 mL = 7