การตรวจวิเคราะห์ชนิดและปริมาณของจุลินทรีย์เนื้อ และผลิตภัณฑ์เนื้อ

บทปฏิบัติการ

เรื่อง   การตรวจวิเคราะห์ชนิดและปริมาณของจุลินทรีย์เนื้อ และผลิตภัณฑ์เนื้อ

 ( Microbiological analysis of meat and meat product )

วันที่ทำการทดลอง : 4 พฤศจิกายน 2558

ตัวอย่างอาหาร :  เนื้อหมูบด

เครื่องมือและวัสดุอุปกรณ์  :

     1.       225 ml Lactose broth

     2.       หลอดทดลอง

     3.       ปิเปต

     4.       plate

     5.       Standard plate count agar ( PCA )

     6.       อาหารเลี้ยงเชื้อ VRBA

     7.       อาหารเลี้ยงเชื้อ Baird-Parker agar

     8.       สารละลาย buffer 225 ml

     9.       อาหารเลี้ยงเชื้อ SC และ RV

     10.   อาหารเลี้ยงเชื้อ HE , BS , XLD

            จุลินทรีย์ที่จะทำการตรวจสอบ

     1.        APC, SPC/g

     2.       Coliform test (CPC/g)

     3.       Staphylococcus aureus

     4.       Salmonella

วิธีการทดลอง

การทำ Standard Plate Count (SPC/g)

     1.       ชั่งตัวอย่างอาหาร 25 g ลงใน flask ที่มีสารละลาย 0.85 % NaCl 225 ml

     2.       ทำ dilution ที่ระดับความเข้มข้น 10-1 , 10-2 และ 10-3

     3.       Pour plate ด้วย PCA

     4.       บ่มที่อุณหภูมิ 30-35 องศาเซลเซียส นาน 1-2 วัน

   

การทำ Coliform test (CPC/g)

     1.       ตังอย่างที่เจือจาง 10-1 , 10-2 และ 10-3

     2.       Pour plate ด้วย VRBA

     3.       บ่มที่อุณหภูมิ 32 องศาเซลเซียส นาน  24 ชั่วโมง

            การวิเคราะห์ Staphylococcus aureus

     1.       ความเข้มข้นที่ระดับ 10-1

     2.       Spread plate ด้วย Baird-Parker agar

     3.       บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน  2 วัน

     4.       ตรวจนับโคโลนีที่มีสีน้ำเงิน หรือสีดำที่มี clear zone

            การวิเคราะห์ Salmonella

            ขั้นตอนที่ 1 Pre-enrichment

     1.       Sample 25 g  +  225 ml Lactose broth

     2.       Stomacher ที่ความเร็วสูงสุด 2 นาที ปิดปากถุงตั้งที่อุณหภูมิห้อง 60 นาที

     3.       เขย่าถุงแล้ววัดด้วยค่า pH ด้วยกระดาษทดสอบให้อยู่ในช่วง 6.8 (sterile 0.1 NaOH, HCl)

     4.        บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน  24 ชั่วโมง

            ขั้นตอนที่ 2 Selective Enrichment

     1.       นำถุงตัวอย่างที่บ่มครบตามเวลาที่กำหนดออกจากตู้บ่มเชื้อ

     2.       ปิเปตใส่ SC และ RV หลอดละ 1 ml

     3.       บ่มที่อุณหภูมิ 43 องศาเซลเซียส นาน  24 ชั่วโมง

            ขั้นตอนที่ 3 Selective plating

     1.       หลอด SC และ RV ที่ positive

     2.       Streak เชื้อลงบน plate ของอาหารเลี้ยงเชื้อ HE , BS , XLD

     3.       บ่มที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียส HE , XLD นาน  24 ชั่วโมง ส่วน BS นาน 48 ชั่วโมง

ตารางบันทึกผลการทดลอง

	ผลการตรวจวิเคราะห์
APC, SPC/g	นับไม่ได้
ปริมาน Coliform                              (CPC/g)	83,000
Staphylococcus aureus	ไม่พบ
salmonella	ไม่พบ

สรุปและวิจารณ์ผลการทดลอง

           ตามมาตรฐานของเนื้อหมูสดกำหนดคุณลักษณะทางจุลชีววิทยาของเนื้อหมูไว้ดังนี้ คือ จำนวนจุลินทรีย์ทั้งหมด ต้องไม่เกิน 5*10^5 โคโลนีต่อตัวอย่าง 1 กรัม  มีปริมาณโคลิฟอร์มไม่เกิน 5*10^3 colony/ตัวอย่าง 1 g  และเชื้อ Staphylococcus aureus ต้องพบไม่เกิน 1*10^2 และ salmonella ต้องไม่พบในตัวอย่าง 25 g                             

                จากการทดลอง พบ SPC/g มีจำนวนมากไม่สามารถนับได้ ปริมาณโคลิฟอร์มมีค่า 83,000 CFU/g  ไม่พบเชื้อ Staphylococcus aureus และไม่พบ salmonella  แสดงว่าปริมาณโคลิฟอร์ม Staphylococcus aureus  และ salmonella  อยู่ในเกณฑ์ที่มาตรฐานกำหนด ส่วน ส่วน SPC/g ไม่สามารถนับได้จึงไม่รู้จำนวนที่แน่นอน อาจจะเป็นไปได้ว่าอยู่ในเกณฑ์มาตรฐานหรือไม่อยู่ก็ได้ ถ้าจะให้นับได้ต้องทำ dilution อีก เพื่อให้จำนวนจุลินทรีย์อยู่ในปริมาณที่สามารถนับได้